Atualmente, o MULTILAB disponibiliza aos seus usuários um Microscópio invertido Nikon Eclipse Ti-U, um sistema cromatográfico HPLC Prominence Shimadzu, um 7500 FAST Real Time-PCR, um Citômetro de fluxo BD FACSVerse™ e um Contador de Cintilação Líquida modelo 300SL Hidex.
A cromatografia é um método analítico de alta precisão largamente empregado em indústrias químicas, farmacêuticas, alimentícias, refinarias, cosméticos, petroquímicas, laboratórios de análises clínicas, laboratório de análises ambientais e forense, utilizado por diversas áreas do conhecimento. Este método é capaz de purificar, quantificar ou ainda identificar vários compostos de uma amostra em poucos minutos, com alta resolução, eficiência e sensibilidade. A capacidade de separar espécies de misturas complexas fez da HPLC uma técnica essencial para fins qualitativos e quantitativos. O MULTILAB disponibiliza um sistema de HPLC Prominence da Shimadzu (Kyoto, Japão), o qual possui injeção automática, detectores SPD-20A, UV/VIS e RF-20A, de fluorescência. Também acompanha o sistema cromatográfico uma Coluna Ascentis® C18 (250 x 2.1 mm, 5 μm), Supelco Analytical (Bellefonte, USA). Disponibiliza-se para composição da fase móvel do sistema HPLC, os solventes orgânicos metanol, acetonitrila, e isopropanol grau HPLC, de pureza mais elevada disponível comercialmente. A água utilizada na composição da fase móvel e no preparo de amostras passa por sistema de ultra purificação Milli-Q. Todos os reagentes da fase móvel passam por etapas de: filtração a vácuo e desgaseificação por vácuo e sonicação em banho de ultrassom, para eliminar microbolhas de ar garantindo a eficiência do módulo de desgaseificação do sistema cromatográfico, e ainda para eliminar eventuais impurezas, aumentando a vida útil da coluna e do sistema.
Para utilização do sistema de HPLC é necessário agendamento prévio. O pesquisador deve preencher completamente o formulário para a reserva do HPLC, disponível para download, e encaminhar para o e-mail multilab@unesc.net.
A confirmação da reserva ocorrerá em um prazo de até 48h após o envio do e-mail pelo pesquisador. Caso o pesquisador não receba uma resposta dentro deste prazo, o mesmo deverá entrar em contato por e-mail ou através do telefone (48) 3431-4518, de segunda a sexta-feira das 9h às 13h e das 14h às 18h. O formulário deverá ser preenchido para a primeira solicitação de reserva referente a um determinado projeto e a obedecerá a ordem cronológica de recebimento dos formulários.
Anteriormente a utilização, o pesquisador deve obrigatoriamente, ler as Normas Gerais de uso do MULTILAB (ML-NG01) e Normas Gerais para uso do HPLC (ML-NHPLC01), as quais encontram-se disponíveis aqui.
A reação em cadeia de Polimerase – PCR (Polymerase Chain Reaction) foi desenvolvida por Kary Mullis na década de 1980. A PCA possibilita síntese de fragmentos de DNA, usando a enzima DNA-polimerase, a mesma da replicação do material genético nas células. O desenvolvimento dessa técnica possibilitou análises de genes com maior precisão, diagnóstico de doenças genéticas, e detecção de agentes infecciosos, como o vírus da hepatite B e C, vírus da imunodeficiência humana (HIV). O MULTILAB disponibiliza um 7500 FAST Real Time-PCR System, da Biosystems, equipameto utilizado para a amplificação de moléculas de DNA in vitro, usando elementos básicos do processo de replicação natural do DNA, isolando em tempo real as sequências específicas a partir de uma mistura complexa de sequências genômicas. As aplicações incluem expressão gênica, quantificação e detecção de ácidos nucleicos, e genotipagem. Ao sistema de PCR em tempo real está acoplada uma câmara conectada a um notebook Latitude E6520 (Dell), o qual possui o Software 7500, que coleta os dados brutos de fluorescência em diferentes pontos durante a corrida (processo) do PCR. O PCR em tempo real utiliza reagentes baseados em fluorescência em cadeia da polimerase, para proporcionar a detecção quantitativa de sequências de ácidos nucleicos alvos, e detecção qualitativa de metas utilizando pós-PCR (endpoint).
Para utilização do sistema PCR Real Time é necessário agendamento prévio. O pesquisador deve preencher completamente o formulário para a reserva do PCR, disponível para download, e encaminhar para o e-mail multilab@unesc.net.
A confirmação da reserva ocorrerá em um prazo de até 48h após o envio do e-mail pelo pesquisador. Caso o pesquisador não receba uma resposta dentro deste prazo, o mesmo deverá entrar em contato por e-mail ou através do telefone (48) 3431-4518, de segunda a sexta-feira das 9h às 13h e das 14h às 18h. O formulário deverá ser preenchido para a primeira solicitação de reserva referente a um determinado projeto e a obedecerá a ordem cronológica de recebimento dos formulários.
Anteriormente a utilização, o pesquisador deve obrigatoriamente, ler as Normas Gerais de uso do MULTILAB (ML-NG01) e Normas Gerais para uso do PCR, disponibilizadas aqui.
O Microscópio invertido Eclipse Ti-U, da Nikon, tem a finalidade de ampliar estruturas, impossíveis de visualizar a olho nu, como células vivas, tecidos ou organismos com o auxílio de lentes objetivas apropriadas para o uso em Fluorescência e Campo Claro (CC). Possibilita também a transmissão e aquisição de imagens através de uma câmera acoplada ao microscópio e conectada ao computador com o Software NIS Br. O microscópio invertido de pesquisa Eclipse Ti-U da Nikon é um modelo universal que pode ser configurado para uso em muitas técnicas de microscopia mais exigentes. O Eclipse Ti-U usa o mundialmente famoso CFI60 sistema óptico e uma grande variedade de objetivas para campo claro, campo escuro, fluorescência, contraste de fase, DIC e técnicas de microscopia de modulação de contraste.
Para utilização do Microscópio Invertido Eclipse Ti-U é necessário agendamento prévio. O pesquisador deve preencher completamente o formulário para a reserva do microscópio, disponível para download, e encaminhar para o email multilab@unesc.net.
A confirmação da reserva ocorrerá em um prazo de até 48h após o envio do e-mail pelo pesquisador. Caso o pesquisador não receba uma resposta dentro deste prazo, o mesmo deverá entrar em contato por e-mail ou através do telefone (48) 3431-4518, de segunda a sexta-feira das 9h às 13h e das 14h às 18h. O formulário deverá ser preenchido para a primeira solicitação de reserva referente a um determinado projeto e a obedecerá a ordem cronológica de recebimento dos formulários.
Anteriormente a utilização, o pesquisador deve obrigatoriamente, ler as Normas Gerais de uso do MULTILAB (ML-NG02) e Normas Gerais para uso do Microscópio, disponibilizada aqui. Também é importante, antes da primeira reserva, que o usuário leia o Manual do Pesquisador, pois o ajudará a manusear corretamente o equipamento, garantindo bons resultados.
Manual do Pesquisador (disponibilizar também para download).
A Cintilografia é uma importante ferramenta de pesquisa dos processos fisiológicos do organismo. A partir de isótopos radioativos, que se concentram em determinado tecido, é possível se obter imagens destes processos. Com auxílio de um detector ou contador de cintilação, é possível definir as rotas metabólicas de um órgão ou tecido específico, assim qualquer desvio desta rota pode ajudar na identificação de anomalias (RIOS, 2016). O Hidex 300 SL é um analisador de cintilação líquida com um amostrador automático e um conjunto triplo tubo fotomultiplicador de detecção. O tubo fotomultiplicador é o responsável por transformar os sinais luminosos-radioativos em sinais elétricos passíveis de serem processados pelo sistema de contagem. Este modelo é o mais adequado para investigação geral nuclear e aplicações biológicas, como estudos de células, medições de citotoxicidade e detecção de consumo primário C-14 e de concentrações ambientais de radioisótopos.
Para utilização do Contador de Cintilação Líquida 300 SL é necessário agendamento prévio. O pesquisador deve preencher completamente o formulário para a reserva do equipamento, disponível para download, e encaminhar para o e-mail multilab@unesc.net.
A confirmação da reserva ocorrerá em um prazo de até 48h após o envio do e-mail pelo pesquisador. Caso o pesquisador não receba uma resposta dentro deste prazo, o mesmo deverá entrar em contato por e-mail ou através do telefone (48) 3431-4518, de segunda a sexta-feira das 9h às 13h e das 14h às 18h. O formulário deverá ser preenchido para a primeira solicitação de reserva referente a um determinado projeto e a obedecerá a ordem cronológica de recebimento dos formulários.
Referências:
HIDEX. Hidex 300 SL. 2016. Disponível em: http://hidex.com/products/liquid-scintillation-counters/hidex-300-sl/
RIOS, E.E.D. Exame cintilográfico. 2016. Disponível em: http://www.ufrgs.br/fismed/cintilografia.htm
A citometria de fluxo é um método emergente que permite a caracterização e análise de células e de alguns de seus produtos. Esta é uma tecnologia poderosa, a qual possibilita análise simultânea de múltiplas propriedades celulares em um sistema de fluxo contínuo (BD Biosciences, 2011). O Citômetro de fluxo BD FACSVerse ™ atualmente disponível no MULTILAB suporta análise de células para aplicações de pesquisa usando até 5 parâmetros. A aplicação entre outras está relacionada com apoptose, ciclo celular, proliferação celular, detecção de citocinas, imunofenotipagem (BD Biosciences, 2016). Qualquer partícula ou célula em suspensão com tamanho entre 0,2 e 50 µm pode ser analisadas por citometria de fluxo (BD Biosciences, 2011). A aplicação da citometria de fluxo para imunofenotipagem tem se tornado ferramenta essencial para a pesquisa e diagnóstico de hematopatologias, como leucemias e linfocitoses. A imunofenotipagem consiste em quantificar diferentes subconjuntos celulares em uma amostra de sangue, medula óssea, ou linfa. Essa quantificação é realizada por meio de marcadores de proteínas específicas de população com um marcador de fluorescência na superfície celular (Seattle Children's, 2016). Para a análise do ciclo celular por citometria de fluxo, com auxílio de corantes fluorescentes, é possível mensurar as quatro distintas fases do ciclo. Este ensaio possibilita a determinação da proliferação/replicação celular, podendo identificar aneuploidias celulares associadas a anomalias cromossômicas. Importante fase normal deste ciclo de vida da célula eucariótica é a apoptose ou a chamada morte programada, a qual é diferenciada de outras formas de morte celular, por distintas alterações morfológicas, bioquímicas e moleculares, possibilitando sua diferenciação por citometria de fluxo (Seattle Children's, 2016). A Biologia Celular é uma das áreas de interesse em relação à análise de proliferação de células, uma vez que possibilita mensurar atividades metabólicas celulares, em resposta a determinados estímulos, como citocinas e outros componentes do meio. Através da citometria de fluxo, utilizando-se como marcadores corantes fluorescentes de membrana celular, é possível medir a proliferação de células, pois à medida que ocorre a divisão celular, metade da quantidade de corante inicial é transferida para as células filhas, assim medindo-se a redução do sinal de fluorescência, pode-se calcular a ativação e proliferação das células (Seattle Children's, 2016).
Para utilização do Citômetro de fluxo BD FACSVerse ™é necessário agendamento prévio. O pesquisador deve preencher completamente o formulário para a reserva do equipamento, disponível para download, e encaminhar para o e-mail multilab@unesc.net.
A confirmação da reserva ocorrerá em um prazo de até 48h após o envio do e-mail pelo pesquisador. Caso o pesquisador não receba uma resposta dentro deste prazo, o mesmo deverá entrar em contato por e-mail ou através do telefone (48) 3431-4518, de segunda a sexta-feira das 9h às 13h e das 14h às 18h. O formulário deverá ser preenchido para a primeira solicitação de reserva referente a um determinado projeto e a obedecerá a ordem cronológica de recebimento dos formulários.
Anteriormente a utilização, o pesquisador deve obrigatoriamente, ler as Normas Gerais de uso do MULTILAB (ML-NG02) disponibilizada aqui.
Referências:
BD BIOSCIENCES. BD FACSVerse: apostila do operador. São Paulo: BD Biosciences, 2011.
_____. BD FACSVerse. 2016. Disponível em:
http://www.bdbiosciences.com/br/instruments/facsverse/index.jsp
SEATTLE CHILDREN’S. Applications of Flow Cytometry. 2016. Disponível em:
http://www.seattlechildrens.org/research/cores/flow-cytometry/applications-of-flow-cytometry/
